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【ZKKL】学术分享 | 透明胶带粘贴皮疹区脱落细胞法鉴别点滴状银屑病与玫瑰糠疹
发表时间:2019-04-15     阅读次数:     字体:【

文章转载自:中国皮肤性病医学杂志

作者:储文军,秦海红,于越,费建飚,冯玉康,王国江

[摘要]银屑病是一种多基因遗传性基础上免疫介导的、慢性复发性炎症性皮肤病。点滴状银屑病属于寻常性银屑病之一,该型银屑病的临床表现以红斑、丘疹、鳞屑表现为主。玫瑰糠疹病因不清,有学者认为与人类疱疹病毒 6 型(HHV-6)与人类疱疹病毒 7 型(HHV7)感染有关,也是一种红斑丘疹鳞屑性皮肤病。点滴状银屑病与玫瑰糠疹二者都好发于躯干部位,肉眼看来有很多相似之处。典型的点滴状银屑病与玫瑰糠疹是容易鉴别的,前者有刮腊现象、薄膜现象与点状出血等特征,后者皮疹的长轴与皮纹方向一致,且部分玫瑰糠疹可以有子母斑等进行鉴别。但不典型的点滴状银屑病与不典型的玫瑰糠疹,二者靠肉眼鉴别有一定困难,此时做皮肤组织病理检查是有价值的鉴别诊断方法。但皮肤组织病理检查是一种有创伤取材方法,患者依从型差。我们根据点滴状银屑病与玫瑰糠疹二者皮疹表层的细胞学种类不同,用透明胶带粘贴皮疹区表层脱落细胞的无创性取材方法鉴别这两种疾病,实验结果满意。

[关键词]银屑病、饮食、病毒、疾病

01

资料与方法

1. 1 研究对象 均为 2015 年 9 月 - 2016 年 12 月至本院皮肤科就诊的患者,对临床表现不典型的银屑病患者及和玫瑰糠疹患者皮损进行组织病理学检查,均签署知情同意书。选择组织病理诊断为点滴状银屑病与玫瑰糠疹的患者各 30 例,其中银屑病组患者中男 18 例,女 12 例,年龄 39. 50 ± 21. 55;玫瑰糠疹组患者中男 14 例,女 16 例,年龄 32. 33 ± 23. 75。两组患者的性别构成比和年龄均具有可比性。

1. 2 试剂和材料 HE 染液,一抗为鼠抗人粒细胞髓过氧化物酶抗体,二抗为辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠 Ig G 多克隆抗体,二氨基联苯胺(DAB)为底物显色试剂盒,均购自美国 Bio Genex公司。EAF 固定液配置:取冰醋酸 5mL,40% 甲醛 10mL,无水乙醇加至 100mL。

1. 3 方法

1. 3. 1 标本采集 两组患者均予市售透明胶带粘贴于皮疹部位,3s 后揭下弃去(去除表面干燥脱落细胞),然后同法在相同部位分别粘贴 3 条胶带取材,供实验用。带有标本的胶带做HE 染色( 去除最初 2 步二甲苯脱蜡步骤) 及免疫组织化学染色,并进行组织细胞学检查。每位患者再进行脱落细胞取材的同时,将两组患者的非透明胶带粘贴皮疹区选择一处做皮肤组织病理检查,进行 HE 染色。

1. 3. 2 标本 HE 染色 有脱落细胞标本的胶带固定于载玻片上,粘有细胞一面朝上制作标本和标记。取其中一张标本用95% 酒精固定,改良 HE 染色,即宫颈表皮细胞染色方法,脱水透明,中性树胶封片后,光镜下观察。

1. 3. 3 免疫组织化学染色 取剩余两张标本用 EAF 固定液在

4℃ 下固定 15min,PBS 冲洗,按试剂盒说明书进行操作。其中

一张标本作为空白对照,另外一张标本做 DAB 显色和 HE 复

染,各 40s。染色和脱水,中性树脂封片,用于光镜下观察。

1. 3. 4 皮损标本 HE 染色 见组织病理操作规程。

1. 4 诊断标准 胶带标本 HE 染色结果中,光学显微镜下细胞核形态来判断细胞类型,将细胞核呈现分叶或杆状判定为中性粒细胞,而圆形或近圆形核为皮肤鳞状细胞,即相当于皮肤组织病理 HE 染色法的角质层角化不全细胞或颗粒层细胞。同时观察中性细胞分布状态,即分散或聚集分布。显微镜下出现群集状分布的中性粒细胞为阳性,诊断为银屑病;未见中性粒细胞或者出现少量散在分布的中性粒细胞为阴性,诊断为玫瑰糠疹。脱落细胞法检测若见中性细胞群聚分布,则判为阳性结果,诊断为点滴状银屑病;若非群集分布诊断( 中性细胞分散分布 + 无中性细胞)则判为阴性结果,诊断为玫瑰糠疹。透明胶带法诊断银屑病的诊断率(% ) = a/(a + b),玫瑰糠疹诊断率(% ) = d/(c + d),总诊断准确率(% ) = ( a + d) /( a + b+ c + d) 。

1. 5 统计学处理 SPSS13. 0 软件,比较透明胶带法诊断结果与组织病理 HE 染色法诊断结果的符合率及中性粒细胞在两组患者中分布情况采用 χ2检验,P < 0. 05 为差异有统计学意义。

02

结果

2. 1 透明胶带 HE 染色结果 两组患者皮损的中性细胞分布情况见表 1,脱落细胞法诊断率与组织病理法诊断情况比较结果见表 2,两组患者的中性细胞群集发生率差异有统计学意义(χ2= 52. 50,P < 0. 01 ) 。透明胶带粘贴正常皮肤、点滴状银屑病皮疹、玫瑰糠疹皮疹,进行 HE 染色后,显微镜下脱落细胞分布情况见图 1 ~ 3。


2. 2 免疫组织化学染色结果 点滴状银屑病组患者标本中粒细胞髓过氧化物酶单抗染色阳性区域有群集细胞核为分叶状和杆状者,进一步证实此类细胞是中性粒细胞,因为中性粒细

胞含有髓过氧化物酶(4)

2. 3 诊断符合率比较 见表 2。透明胶带细胞法对点滴状银屑病和玫瑰糠疹的诊断符合率分别为 93. 33% 100. 00% ,总诊断准确率为 96. 67%

03

讨论

透明胶带取材法从皮疹区粘取毛囊蠕形螨、疥螨、浅部真菌等已经应用多年。但应用透明胶带粘贴皮疹脱落细胞用于研究皮肤病的诊断问题,在国内外文献中罕有报告。近年来,

国内学者陈向明等率先研究用透明胶带粘贴皮疹区的表皮脱落细胞,鉴别不典型斑块状银屑病与不典型钱币状湿疹,在小样本内取得了满意结果。本研究采用皮疹区脱落细胞法鉴

别不典型的点滴状银屑病与不典型玫瑰糠疹。我们知道,无论进展期银屑病还是静止期银屑病,乃至各型别银屑病皮损最关键特异的组织病理特征是在角质层的角化不全上部有中性粒

细胞聚集即 Muro 微脓肿,在点滴状银屑病 Muro 微脓肿可以呈驼峰样。Muro 微脓肿的发生机制与 IL-8引起的中性粒细胞趋化密切相关。Muro 微脓肿这个独特的组织病理特点为利用透明胶带粘贴皮疹表层脱落细胞法诊断银屑病提供了理论及实验依据。而玫瑰糠疹组织病理的表皮层有灶性角化不全,通常没有Munro 微脓肿形成,我们在组织病理诊断为玫瑰糠疹患者的透明胶带脱落细胞方法中也印证了这一点。

将组织病理诊断为点滴状银屑病及玫瑰糠疹者作为两种疾病诊断的金标准(即诊断率为 100. 00% )。本透明胶带脱落细胞诊断法分别与其比较,结果银屑病的诊断率为 93. 33%

(28 /30),玫瑰糠疹的诊断率为 100. 00% (30 /30),总准确率96. 67% 。表明该实验方法非常接近金标诊断法,表明该研究有重要临床应用价值。

本研究通过免疫组化法证实这些簇集的杆状核及分叶核细胞全部为中性粒细胞,表明 HE 染色法即可独立用于中性粒细胞定性,这样在临床实际应用中就不必做免疫组化染色,可以显著降低检验成本。关于2 例点滴状银屑病患者的中性粒细胞呈散在分布,其可能与粘贴胶带偏离皮疹有关,没有粘取到中性粒细胞群集区域所在的部位,或者与一次性取材恰好粘贴到角化不全层,而遗漏的下面的 Muro 微脓疡层,所以建议在皮疹区连续粘贴 2 次,可能会提高阳性比例。在表皮角质层中,中性粒细胞浸润的疾病除银屑病外,还有体癣、脓皮病、脓疱病、念珠菌病、脂溢性皮炎和梅毒等。但这些疾病在临床表现及其他实验室检查方面可以鉴别,不在本研究范围内。

本项透明胶带粘贴皮疹表皮脱落细胞法的适用范围是已经排除其他类似皮肤病,仅仅在不典型点滴状银屑病与不典型玫瑰糠疹二者无法鉴别时使用。尽管透明胶带脱落细胞诊断法不像皮肤组织病理那样可以纵向地看到表皮、真皮及皮下组织病理情况,但该法具有操作简单、检验成本低、患者依从性高等优点,有进一步研究与应用价值。

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