转自中国皮肤性病医学杂志2017年01期

汪丹，何永萍，汪盛

毛发上皮瘤可分为孤立型及多发型，多发型被称为多发性家族性毛发上皮瘤( multiple familial trichoep-ithelioma，MFT，OMIM 601606 ) 。MFT 与遗传有关，多为常染色体显性遗传，常在幼年或儿童期发病，而单发者无家族史。MFT 的临床特征为沿着鼻唇沟对称分布的多发性半球形丘疹和结节，呈正常肤色，表面光滑，坚实透明，亦可累及额头、眼睑和上唇等部位。2004 年，张学军等确定MFT的致病基因为CYLD，该基因同时也是家族性圆柱瘤( familial cylindromatosis，FC，OMIM 132700) 、Brooke-Spiegler综合征 ( Brooke-Spieglersyndrome，BSS，OMIM 605041) 的致病基因。但MFT 可能存在遗传异质性，国内外文献均显示部分患者未检测出 CYLD 基因突变，MFT 患者CYLD 基因突变率仅约 46%。本研究对一个MFT家系的CYLD 基因进行突变分析，发现了1 个无义突变 c. 2272C ＞ T。推测c. 2272C ＞ T 可能是CYLD 基因突变好发位点，除MFT 外，该突变在FC和BSS患 者中均有报道。

1 材料与方法

1.1 病例资料

见图 1。先证者为 43 岁女性，于 17岁时双侧鼻唇沟出现约粟粒大肤色丘疹，隆起，有光泽，质硬，随着年龄的增长，皮疹逐渐增多并增大，扩展至鼻部和双眼睑内侧，无自觉症状。体检: 各系统检查未见异常，其父母非近亲结婚。皮肤科情况: 鼻唇沟、鼻部、双眼睑内侧散在分布粟粒至绿豆大小的肤色半球形丘疹，表面光滑，质地坚实( 图 2) 。先证者女儿于14 岁时发病，皮损数量较少( 图 3 ) 。先证者皮损组织病理示: 真皮内嗜碱性基底样瘤细胞排列成团块样，境界清楚，其间为纤维性间质，并见角囊肿( 图 4)。诊断: 家族性多发性毛发上皮瘤。

1. 2. 2 引物的设计与合成

通过美国国家生物信息中心( NCBI) 的基因库检索到 CYLD 基因序列( GeneID: 1540) ，用 Premier Primer 5 软件设计上述基因各外显子引物，扩增包括编码序列和剪切位点序列。引物由上海生工生物技术服务有限公司合成。

1. 2. 3 PCＲ 扩增

PCＲ 扩增体系体积 25μL，含 10 ×缓冲液 2. 5μL、d NTP 0. 8mmol/L、Mg Cl21. 5mmol / L、引物各 0. 5μmol/L、模板 DNA 0. 2μg、Taq DNA 聚合酶1U。PCＲ 反应条件: 94℃ 预变性 5min 后，94℃ 变性30s，58℃ 退火 30s，72℃ 延伸 1min，共 35 个循环。72℃后延伸 5min。PCＲ 产物 4℃保存，取5μL PCＲ 产物进行 1. 5% 琼脂糖凝胶电泳检测。

1. 2. 4 PCＲ

产物测序分析 PCＲ 产物纯化后，用 ABIPＲISM 3730XL 自动测序仪直接双向测序。用 Sequen-cer 4. 10. 1 Demo 软件与基因组序列进行比对，查找有无突变。

2 结果

先证者及其女儿CYLD基因第17 号外显子均存在一个杂合无义突变 c. 2272C ＞ T，导致该处密码子由CGA 变成TGA，使得第758位氨基酸由精氨酸( Ｒ) 突变为终止密码( p. Ｒ758X) 。家系中其他成员和100 例健康对照中均未发现此突变( 图 5) 。

3 讨论

CYLD基因又名圆柱瘤基因，位于常染色体16q12-16q13，全长约 56kb，包含20 个外显子，其中前3 个外显子不编码蛋白质。目前已证实CYLD 基因含3 个CAP-GLY 区域 ( aa. 127 ～203，232 ～285，472 ～540)，2 个脯氨酸富集区( aa. 388 ～ 413，446 ～471 ) ，4个 Cys-X-X-Cys( aa. 788 ～856) 和 2 个泛素羧基末端水解酶 2 型催化区( UCH2-1，UCH2-2; aa. 593 ～610，871～899)。该基因编码一种具有去泛素活性的酶，此酶通过参与其靶蛋白的翻译后修饰及去除靶蛋白第 63 个氨基酸-赖氨酸所关联的泛素而发挥作用。CYLD负性调节 TＲAF2，TＲAF6，NEMO 及 BCL3 等蛋白，从而影响NF-κB 信号通路。该基因突变导致 NF-κB信号途径失去调节，表皮附属器组织过度增生，形成肿瘤。CYLD是 MFT、FC 和BSS 共同的致病基因。

毛发上皮瘤( trichoepithelioma) 又名囊性腺样上皮瘤和多发性良性囊性上皮瘤。MTF 组织病理特征为真皮内有多个基底样细胞构成的细胞团块，边缘细胞呈栅栏状排列，伴不同程度的毛发结构，可见角质囊肿，中心完全角化。本文报告的家系中母女 2 代 2 人发病，呈常染色体显性遗传模式，结合临床表现和组织病理检查，符合MFT 的诊断。FC 也是一种良性皮肤附属器肿瘤，被认为起源于皮肤的外泌汗腺及顶泌汗腺细胞，其显微镜下的特征被称为圆柱瘤。该病好发于头颈部，皮损多呈结节状，直径数毫米至数厘米。有时头皮部位的皮损融合成片状，被形象地描述为“头巾瘤”。圆柱瘤的组织病理学特征为肿瘤团块的基膜样组织将瘤体分隔为岛屿状，岛屿间常含黏液样间质，内由 2 种细胞组成，外周细胞核小，胞质深染，呈栅栏状排列; 中间细胞核大而胞质淡染。BSS则是一种以多发性皮肤肿瘤为特征的综合征，以圆柱瘤、汗腺瘤及多发性毛发上皮瘤多见。该病患者通常会出现大量的皮损，甚至头面部多达数百个肿瘤相互融合，从而致严重容貌损毁。上述三种疾病具有共同的遗传学基础和发病机制，有学者推测它们可能均发生自毛囊 － 皮脂腺 － 大汗腺单位，从未分化的母细胞，由于向不同方向分化而分别出现或同时出现。截止 2015 年，Nikoletta Nagy 等统计共有 95 种CYLD 基因的致病突变被报道。 其中移码 突变占48% ，无义突变占 27% ，错义突变为 12% ，剪切位点突变为 11% 。多数突变位于第 9 ～ 20 号外显子。在上述突变类型中，无义突变重复发现的频率最高，并且表现出明显的表型异质性，如 c. 1112C ＞ A( p. S371X) ，c. 2272C ＞ T( p. Ｒ758X) ，c. 2806C ＞ T( p. Ｒ936X) 的无义突变在 FC，BSS 及 MFT 的患者中均有发现。本文报告的家系中两位患者均检测到 CYLD 基因无义突变 c. 2272C ＞ T( p. Ｒ758X) ，该突变导致 CYLD 基因 4个 Cys-X-X-Cys 和 UCH2-2 区域失去编码功能，蛋白翻译进行到第 758 个氨基酸即提前终止。c. 2272C ＞ T在全世界多个种族中反复被发现，被认为是CYLD 基因的一大突变热点，该突变具有高度的表型异质性，可以表现为FC，BSS及MFT 中的任意一种，我们推测这种高度的表型差异可能与基因修饰及环境因素有关。

综上所述，本研究在一个MFT家系患者中检测到CYLD 基因杂合无义突变c. 2272C ＞T，该突变在MFT、家族性圆柱瘤和 Brooke-spiegler 综合征患者中均有报道，其具有高度的表型异质性。CYLD 基因同一无义突变导致不同肿瘤发生的机制尚需进一步研究。

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